Immunfluoreszenz, um die zelluläre Aufnahme von menschlichem Lactoferrin und die damit verbundenen antivirale Aktivität gegen das Hepatitis C Virus-Monitor

The human lactoferrin (hLF) is a component of the immune system. In this study, immunofluorescence assays are used to demonstrate both the hepatocellular uptake of hLF and a qualitative reduction in the hepatitis C virus replication upon treatment with hLF.

Immunfluoreszenz ist eine Labortechnik häufig verwendet, um viele Aspekte der Biologie zu studieren. Er wird üblicherweise verwendet, um die Verteilung und / oder die Lokalisierung eines Zielmoleküls in Zellen und Gewebe zu visualisieren. Immunfluoreszenz beruht auf der Spezifität von Fluoreszenz-markierten Antikörpern gegen die entsprechenden Antigene in der Zelle. Direkte und indirekte Immunofluoreszenz Ansätze können verwendet werden, die auf der Verwendung von Antikörpern, die mit einem Fluorochrom gebunden verlassen. Direkte Immunfluoreszenz wird seltener verwendet, da sie geringere Signal, mit höheren Kosten und weniger Flexibilität. Im Gegensatz dazu ist die indirekte Immunfluoreszenz mehr allgemein wegen seiner hohen Empfindlichkeit verwendet und liefert ein verstärktes Signal seit mehr als einem sekundären Antikörper kann an jeden primären Antikörper zu befestigen. In diesem Manuskript wurden sowohl Epifluoreszenzmikroskopie und konfokale Mikroskopie verwendet, um die Internalisierung von menschlichem Lactoferrin, eine wichtige Komponente der Immun überwachenSystem, in Leberzellen. Außerdem überwacht wir die Hemmpotenzial hLF auf die intrazelluläre Replikation des Hepatitis C-Virus mittels Immunfluoreszenz. Sowohl die Vorteile und Nachteile, die mit diesen Ansätzen verbunden sind, diskutiert.

Immunofluorescence is a technique that uses a fluorescence microscope to visualize the distribution and/or localization of a target molecule in a biological sample. Immunofluorescence relies on the specificity of fluorescent-labelled antibodies against their corresponding antigens within a cell¹. It is typically used on tissue sections and cultured cell lines in order to analyze the distribution/localization of various biological molecules such as proteins, nucleic acids and glycans. It should be noted that immunofluorescence is often used in combination with other non-antibody methods of fluorescent staining such as the 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)....

1. Zellen Vorbereitung und Behandlung

1. In einer 24-Well-Platte, legte ein Glasabdeckung am Boden der Wells. Mit phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) Waschen Sie jede Vertiefung geben.
2. Samen Huh-7 Zellen Stütz HCV subgenomische Replikon in jeder Vertiefung bis zu einer Dichte von 5 × ¹⁰ 4 Zellen / Vertiefung. Wenn es keine Behandlung, um zu tun, können die Zellen in einer höheren Dichte ausgesät werden. Das Kulturmedium ist Dulbecco modifiziertem Eagle Medium (DMEM) mit 10% Fetal Bovi.......

Die Fähigkeit der Leber Huh-7-Zelllinie exogen administrated hLF internalisiert wurde mittels Immunfluoreszenz auf einem konfokalen miscroscope überwacht. hLF wurde zu dem Kulturmedium zugegeben, und die Internalisierung wurde 24 h erlaubt, wonach wurde extrazelluläres hLF mit PBS gewaschen und restliche Membran gebunden hLF wurde mit einer 5 min Trypsinbehandlung (1 ml) abgebaut. Die Zellen wurden ausgesät und man ließ sie wieder halten 18 Stunden vor der Immunfluoreszenzfärbung. Um die cytoplasmatischen Grenzen .......

Die HCV-Epidemie bleibt eine globale Bedrohung, mit 80% der neu infizierten Patienten entwickeln eine chronische Infektion, indem sie mit einem Risiko für Leberzirrhose, Leberversagen oder Leberzellkarzinom. Direkt wirkende antivirale Mittel Targeting HCV-Replikation und Reifung stellen erstklassige Anti-HCV-Mittel, wie kürzlich von der behördlichen Genehmigung von zwei NS3 N-Terminus-Protease-Inhibitoren (Boceprevir und Telaprevir) demonstriert. HLF anti-HCV-Aktivität wird derzeit angenommen, dass als das Eindringe.......

This work was funded by both the Canadian Institutes of Health Research and Natural Sciences and the Engineering Research Council of Canada. M. Bisaillon is a Chercheur Boursier Senior from the Fonds de Recherche en Santé du Québec and also a member of the Centre de Recherche Clinique du Centre Hospitalier Universitaire de Sherbrooke. We thank Dr. Ralf Bartenschlager for the generous gift of the HCV replicon system. We also thank Dr. Charles Rice and Dr. Daniel Lamarre for kindly providing the hepatic cell line. We also want to thank Guillaume Tremblay for technical assistance.